KURZBESCHREIBUNG DER LÖSUNG
Verbesserung des Daten-CV in
der Multi-Parameter-Durchflusszytometrie
Herausforderung
Von klinischen Tests bis hin zur immunologischen Forschung im Zusammenhang mit Covid-19 gibt es eine wachsende Nachfrage nach einer größeren Anzahl von Parametern in der Multiparameter-Durchflusszytometrie. Leider ist die Durchflusszytometrie eine statistische Methode. Natürliche Variationen in den Zellen und die Menge jedes Fluorochroms, das an einzelne Zellen bindet, bedeuten, dass die aufgezeichneten Daten eher „Punktwolken“ als einzelne Punkte bilden. Eine eindeutige Zählung erfordert daher, dass der Variationskoeffizient (CV oder rCV) dieser Daten auf jede erdenkliche Weise minimiert wird, um die Überlappung der Punktwolken zu reduzieren.
Lösung
Die OBIS-Familie der intelligenten Laser von Coherent unterstützt auf zwei Arten eine größere Anzahl von Parametern mit niedrigem CV. Erstens verfügen sie über außergewöhnliche Signal-Rausch-Verhältnisse (SNR), die sich durch geringes Amplitudenrauschen, hohe Strahlqualität und thermisch stabile Ausrichtung auszeichnen. Dies ist ein entscheidender Vorteil, da das Laser-SNR direkt zum Datenrauschen und damit zum Gesamtdaten-CV beiträgt. Zweitens verwenden diese Laser mehrere verschiedene Technologien, um jetzt über 30 verschiedene Anregungswellenlängen zu liefern. Insbesondere neue UV- und Nah-IR-Wellenlängen können die spektrale Bandbreite der Detektion direkt erhöhen. Eine Erhöhung der Bandbreite bedeutet, dass mehr Parameter mit demselben Gerät gemessen werden können, während die gleiche spektrale Trennung beibehalten wird. Dies hat den gleichen Effekt wie das Absenken des Daten-CVs.
Die Strahlqualität wirkt sich auf die Fähigkeit aus, eine nahezu gleichmäßige Intensität über den Fluss zu erzeugen. Der Einfluss der Strahlqualität auf das Instrumentenrauschen hängt teilweise von der Größe der anvisierten Zellen ab. Im Strömungsfluss haben kleinere Zellen haben eine größere Variation in ihrer Lage und benötigen eine bessere Gleichmäßigkeit der Anregung. OBIS-Laser erzeugen einen kreisförmigen Ausgangsstrahl mit einem Strahlqualitätsparameter, der typischerweise kleiner als M2 ≤ 1,2 ist. Das ist gut auf das Zählen von Blutzellen abgestimmt. Im Gegensatz dazu führt ein hoher M2-Wert zu einem ungleichmäßigen Muster sowohl im Nah- als auch im Fernfeld.
OBIS-Laser sind auch mit verschiedenen Ausgangsleistungen erhältlich und unterstützen die direkte Modulation, was einen schnelleren Instrumentendurchsatz und eine geringere Komplexität des Instruments ermöglicht.
Vorteil
Ganz gleich, wie gut ein Instrument konzipiert und zusammengebaut ist, seine Leistung hängt letztendlich von der Leistung der kritischen Komponenten ab. Die Laser sind wohl die wichtigsten Komponenten in der Durchflusszytometrie. Ihre Leistung sollte niemals der begrenzende Faktor sein, der den Datenlebenslauf erhöht. Der Einsatz von OBIS-Lasern gewährleistet optimale Leistung bei anspruchsvollsten klinischen und Forschungsanwendungen.
Anwendungsfeld
Multi-Parameter-Durchflusszytometrie, Immunologie, Hämatologie, Blutanalyse.
Abbildung 1: Bei Multi-Parameter-Instrumenten erzeugt jeder Zellentyp eine Verteilung von Datenpunkten anstatt eines lokalisierten Datenpunkts. Diese Verteilung wird als „Punktdiagramm“ bezeichnet. Bild mit freundlicher Genehmigung von IDEXX Laboratories, Inc.
Abbildung 2: Große M2 können ein fokussiertes Intensitätsmuster mit groben Unregelmäßigkeiten verursachen (siehe oben). OBIS-Laser liefern M2 ≤1,2 mit einem kreisförmig fokussierten Spot (unten).
